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377A型DNA测序仪的保养及常见故障的排除

DNA序列测定与基因扫描是分子生物学的重要技术之一,是了解基因结构和功能的基础。我公司自引进了ABI377A型DNA以来,进行了大量的测序及基因扫描工作。该仪器测序片段长,分辨率高,一次电泳样本数多,速度快,这些优点都是旧型DNA测序仪所不能比拟的。现将我司3年来对该仪器的保养及常见故障的排除方法介绍如下:

保养注意事项

一、 对新玻璃板的处理 由于新玻璃板带有很多油渍,普通清洁剂较难清洗,故用乙醇氢氧化钾溶液或浓度3mol/L HCL溶液洗涤。

1. 乙醇氢氧化钾溶液的配制:将15gKOH加入100ml无水乙醇中充分溶解。该溶液最好在配制后一年内使用。

2. 放平玻璃板,将内面向上,铺上颜色、吸湿性好的毛巾在玻璃板内面。

3. 倒大约15ml乙醇氢氧化钾溶液或浓度为3mol/L HCL 溶液在毛巾上,让溶液停留5分钟。

4. 拿走毛巾,用蒸馏水或去离子水彻底冲洗玻璃板,置超净工作台晾干。

注意:别让溶液在玻璃版上停留过长时间,以免损伤玻璃。

二、 玻璃板的常规洗涤 电泳结束后,用报纸印去聚丙烯酰胺凝胶,用1% alconox 溶液擦洗,用热水彻底冲洗,再用去离子水冲洗,置超净工作台晾干。

三、 实验结束后,尽快取下前散热板,再取下玻璃板,关掉电源。

四、 冷却溶液瓶的冷却溶液(5%antifreeze)须每月更换,以确保电泳时聚丙烯酰胺凝胶的温度保持在51℃.

五、 不要用笔标记上下电泳缓冲液槽、电泳梳子及玻璃板,以免电泳时,传送到电脑的图像出项非特异性的迁移荧光性物质。

常见故障的排除

一、 电泳的条带倾斜或变形

1、 原因分析:(1)电泳玻璃板不干净;(2)没有正确的夹紧玻璃板;(3)聚丙烯酰胺凝胶有小气泡。

2、 排除方法:严格按常规方法洗涤电泳玻璃板,确保玻璃板洁净、干燥。灌注胶时,玻璃板必须放平,spacer放在上下两块玻璃板之间的两侧边,对齐。然后用夹子夹在两边的spacer上,注意不要夹玻璃板的底部,两边的夹子力度必须相同。灌胶速度要缓慢,一边灌胶一边用手轻敲玻璃板,以防小气泡的形成,使聚丙烯酰胺凝胶均匀布满两块玻璃板之间,在20℃-23℃下凝固。电泳前须清洗掉玻璃板外表面残留的凝胶,晾干。特别要注意激光头读数区域的清洁,可用乙醇氢氧化钾溶液或浓度为3mol/L HCL溶液洗涤。

二、 电泳速度的改变,表现为过快、过慢或胶与胶之间电泳速度不一致

1. 原因分析:(1)使用低质量、过期的试剂;(2)电泳缓冲液浓度不正确;(3)丙烯酰胺胶溶液浓度不正确;(4)聚丙烯酰胺凝胶的厚度不一致;(5)聚丙烯酰胺凝胶放置时间过长,局部凝胶收缩、干燥。

2. 排除方法:使用质量保证、新鲜的试剂,必须使用超级纯的尿素,严格按说明书要求配制各种试剂。电泳缓冲液须现配现用,电泳缓冲液如有沉淀即不可使用。上下电泳缓冲液槽带TBE浓度要一致,否则将影响DNA的迁移。配制丙烯酰胺胶溶液时,不要加热溶解尿素,将胶溶液通过过滤孔直径0.2um的滤膜过滤,不可冷冻胶溶液,以免尿素析出。按上述方法灌注胶,灌胶后,用保鲜膜包住玻璃板上下两端,灌好的胶须在2-6小时内使用,以免凝胶收缩、干燥。

三、 冷却系统障碍,表现为冷却溶液通过散热板时受阻,电脑屏幕跳出对话框,显示“the pump has shut down”.

1. 原因分析:冷却溶液钙盐沉淀,使冷却系统阻塞。

2. 排除方法:利用3%硝酸溶液清洗冷却系统,溶解钙盐,使冷却系统畅通。步骤为:(1)启动机器(2)旋下机器右侧边装冷却溶液的瓶子,倒掉旧的的冷却溶液。加入3%硝酸800ml溶液到瓶子,旋紧。(3)打开collection software, 再打开Windows菜单,选择manual control。

(4)打开fxn name pop-up 菜单,选择pump on,在value box 里填写51,点击execute(5)让硝酸溶液在冷却系统内循环15-30分钟;(6)打开fxn name 菜单,选择pump-off, 点击execute, 循环停止;(7)旋下瓶子,倒掉硝酸溶液,加入800ml去离子水,旋紧,按步骤(3)(4)方法清洗冷却系统,重复2次,每次循环1-2分钟。(8)配制5% antifreeze 800ml,装入冷却液瓶。

此外,应注意每月更换冷却溶液,如果仪器使用频率较高,可半月更换一次。


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